贝莱斯芽孢杆菌NS18Y101对柑橘黄龙病具有明显的生防作用

柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing，HLB)是一种由韧皮部杆菌属亚洲种(CandidatusLiberibacter asiaticus，CLas)引起的毁灭性柑橘病害，目前尚未发现高抗柑橘品种或特效防治药剂。由于CLas尚无法体外纯培养，西南大学柑桔研究所/国家柑桔工程技术研究中心自重病柑橘园无HLB症状植株中分离纯化内生菌，再利用Pseudomonassyringaepv. tomato(PstDC3000)和Ralstoniasolanacearumpv. tomato(RstGMI100)作为指示菌进行平板对峙试验初步筛选生防菌株；以盐酸四环素处理为对照，通过半叶法和盆栽法评价生防菌株对CLas的生防作用；通过形态学、生理生化和分子生物学鉴定生防菌株的分类地位，以期为黄龙病的防控提供新手段。通过上述试验方法自重病果园无症植株分离纯化获得64株内生菌，其中8株对PstDC3000和RstGMI100具有明显的拮抗活性。半叶法组织抗性评价中的实时定量PCR(Real-time quantitative PCR，qPCR)检测结果表明，在8株潜力生防菌中，NS18Y101处理的柑橘叶片中CLas相对含量降幅最大，达到极显著(p<0.001)，与对照抗生素处理相似。盆栽试验的qPCR结果表明，与0 dpi (days post inoculation)相比，在30 dpi、60 dpi和90 dpi时，NS18Y101处理植株中的CLas相对含量均极显著下降，与正对照抗生素处理相似，而负对照NA培养基处理植株中CLas相对含量无显著变化，呈逐渐小幅上升趋势；胼胝质测定结果显示，NS18Y101处理后60 dpi和90 dpi时胼胝质含量均显著降低。

这些结果表明NS18Y101对CLas具有明显的生防作用。再将菌株NS18Y101的16S rRNA 基因核苷酸序列在NCBI数据库进行BLAST，序列分析结果显示，其与贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)序列同源性为100%，在基于相近核苷酸序列构建的系统发育树上，NS18Y101与B.velezensis关系最近，聚为一枝。结合形态学观察和生理生化指标特征分析结果表明NS18Y101为贝莱斯芽孢杆菌。